Kalvosuodatusmenetelmä
veden mikrobiologisessa tutkimuksessa

Periaate
Vesi suodatetaan kalvon läpi, jonka huokoskoko on riittävän pieni pidättämään bakteerit kalvolle. Kalvo inkuboidaan kiinteällä kasvualustalla. Lisääntymiskykyiset bakteerit kasvavat tietyissä olosuhteissa pesäkkeiksi, jotka lasketaan.

Laitteet ja välineet

• Lasitavarat
  Lasitavarat pestään synteettisellä pesuaineella ja kuumalla vedellä, huuhdellaan 6 – 12 kertaa kuumalla vedellä ja lopuksi puhtaalla vedellä. Lasitavarat steriloidaan 1h 170 °C.
• Näyte- ja laimennusvesipullot
  Lasi- tai muusta sopivasta materiaalista valmistetut pullot steriloidaan. Jos pullossa on hioskorkki, korkki suojataan foliolla.
• Pipetit
  Pipettien tulee tyhjentyä nopeasti ja niin tarkasti, että pipetin virhe ei ylitä 2,5% ja tilavuusmerkintöjen tulee olla selvät. Pipetit steriloidaan kuumailmakaapissa astiassa, joka ei sisällä kuparia.
• Petrimaljat
  Lasimaljat steriloidaan kuumailmakaapissa. Muovimaljat myydään steriileinä.
• Suodatinlaite
  Suodatinlaitteisto koostuu:
  1. Saumattomasta suppilo, jossa on suodatinta kannattava tukeva huokoinen kalvo
  2. imupullo
  3. vesisuihkupullo
     Suodatinlaite steriloidaan autoklavoimalla. Suppilo voidaan steriloida myös polttamalla 20 – 30 s etanolia siinä.
• Suodatinkalvot
  • Suodatinkalvot voidaan steriloida autoklaavissa 10 min 121°C. Valmiiksi steriloituja kalvoja on saatavilla kaupallisesti.
• Pyöreäkärkiset pinsetit
• Kuumailmakaappi vähintään 170 °C.
• Lämpökaappi inkobointia varten
• Autoklaavi sterilointia varten
• Pesäkelaskulaitteisto

Kasvualusta ja laimennusvesi
Reagensseina käytetään analyysipuhdasta laatua. Puhdistetun veden sähkönjohtavuuden on oltava < 0,1 µS/cm eikä siinä saa olla yli 45 µm läpimittaisia hiukkasia ja kuparipitoisuuden tulee olla alle 10 µg/l.

Kasvualusta
Kasvualustaa käytetään sellainen määrä, että maljalle tulee vähintään 2 mm paksuinen kerros.

Laimennusvesi

• Kaliumdivetyfosfaatti, KH₂ PO₄         0,0425 g
• Magnesiumsulfaatti, Mg SO₄ 7H₂O   0,250 g
• Natriumhydroksidi, NaOH                  0,008 g
• Puhdistettu vesi                                1 l

1. Kaliumdivetyfosfaatin kantaliuos
   Liuotetaan 42,5 g KH₂ PO₄ litraksi liuosta.
2. Magnesiumsulfaattiliuos
   Liuotetaan 50,0 g Mg SO₄ 7H₂O litraksi liuosta.
3. Natriumhydroksidiliuos
   Liuotetaan 8 g NaOH litraksi liuosta.
4. Natriumkloridiliuos
   Liuotetaan 10 g NaCl litraksi liuosta. Natriumkloridi liuosta käytetään puhdistetun veden asemasta tutkittaessa murtovesiä.
   
5. Laimennusveden valmistus
   990 ml puhdistettua vettä tai 990 ml 10 g/l NaCl liuosta lisätään 1 ml kaliumdivetyfosfaatin kantaliuosta, 5 ml magnesiumsulfaattiliuosta ja 1 ml natriumhydroksidiliuosta ja täytetään litraksi. Steriloidaan autoklaavilla 15 min 120 °C.

Näyte
Näyte otetaan työohjeen vesinäytteenotto mikrobiologisessa tutkimuksessa mukaan.

Suoritus
Kalvo steriloidaan keitetyssä vedessä muutama minuutin ajan. Pinsetit steriloidaan kastamalla ne etanoliin ja sytyttämällä pinsetteihin jäänyt alkoholi tuleen. Steriloitu kalvo siirretään steriloiduilla pinseteillä steriloidun suodatinlaitteen huokoiselle levylle. Suodatinlaite ja kalvo jäähdytetään suodattamalla steriiliä vettä. Näyte sekoitetaan ravistamalla pulloa 25 kertaa. Edullisin pesäkemäärä on halkaisijaltaan 45 mm kalvolla noin 100 kappaletta. Jos näytettä laimennetaan tehdään siitä eksponentiaalinen laimennussarja 1/10 (10 ml näytettä 90 ml laimennusvettä) tai 1/100
(1 ml näytettä 99 ml laimennusvettä).

Etusivu > Ympäristöanalyysit > Kalvosuodatusmenetelmä

Raportointi-
kaavake
(33 kt Word)